产品目录

保存：-20℃

包装内容：(动物总蛋白提取液只提供变性或者非变性一种)
产品简介：
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞，使之释放出细胞内蛋白，用于后续实验。
动物总蛋白提取液(非变性)能最大程度地保留蛋白天然结构和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
动物总蛋白提取液(变性)裂解细胞的效率更高，主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验，还可以用于Western Blotting。
注意事项：
1.在裂解液中选择性加入1/100的蛋白酶抑制剂/磷酸酶抑制剂/PMSF溶液。
2.整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS均需预先冷却。
3.本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响，因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法：
一：处理贴壁的培养细胞
1.去除贴壁细胞培养液，用冰浴预冷的PBS洗两遍，去尽残留的PBS。
2.将培养板放置在冰上待用。
3.按每106个细胞加入0.1mL本产品(或100mm贴壁细胞加1mL提取液)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5～10mg/mL之间)。
注意：裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1～2×106细胞)需要0.1～0.2mL本产品；25cm2培养瓶(3～6×106细胞)需要0.3～0.6mL；75cm2培养瓶(1～2×107细胞)需要1～2mL。对于特别大或特别小的细胞，需要用户摸索最佳用量。
1.冰上放置10～30分钟(最佳时间跟细胞系相关)，其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
2.将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端，并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
3.15000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
4.使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二：处理悬浮细胞
1.400g，4℃离心10分钟收集悬浮细胞，弃上清。
2.用等体积的预冷PBS洗涤细胞沉淀两遍，步骤同第一步。
3.按每106个细胞加入0.1mL本产品的比例加入提取液，充分悬浮细胞。
4.冰上放置15分钟裂解细胞，期间偶尔轻柔震荡。
5.15000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀，最好留20～40μL液体不取。
6.将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
7.使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三：处理组织块
1.称量组织块，用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆，用5～10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2.将匀浆物转移到离心管中，1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3.按每50mg组织加入0.2mL提取液的比例加入预冷的提取液，吹打混匀，放置冰上。
4.每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次，共4次。
5.15000×g、4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
6.使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
相关搜索：动物总蛋白提取试剂盒(非变性)